毕赤/酿酒酵母蛋白表达
酵母表达系统兼顾原核体系的周期短、成本低廉、易操作等优点，同时具备真核细胞的空间折叠与糖基化修饰能力，使蛋白可溶性大幅提高。
酵母表达系统
毕赤酵母体系是真核体系中操作简单、成本低廉的系统，在蛋白加工、折叠、翻译后修饰等方面具有诸多优势。
酵母表达系统是工业微生物中应用较广泛的系统，兼有了原核表达的周期短、成本低廉、易操作等优点，易于工业级别放大培养；同时具备了真核细胞对蛋白的空间折叠，糖基化修饰等能力，使得蛋白可溶性大幅度提高，为研究蛋白的生理活性提供了强有力的工具。
生命科学进入后基因组时代，在许多科研项目中，获得具有空间结构和生物学活性的重组蛋白是非常关键的步骤。虽然原核体系也能获得蛋白，但是由于宿主系统的限制，依然有很大一部分重组蛋白没有活性。
毕赤酵母体系是真核体系中操作简单、成本低廉的系统，在蛋白加工、折叠、翻译后修饰等方面具有诸多优势，在毕赤酵母体系中蛋白转录后糖基化所增加的寡糖链长度（平均每个支链8-14个甘露糖残基）非常接近高等真核生物的结构，活性几率大大高于原核体系。
毕赤酵母表达流程
从载体构建到单克隆筛选，最终选择表达量最高的体系进行大量表达。
- 01将目的基因插入到pPICZ或pPICZa毕赤酵母表达载体上
- 02使用内切酶SacⅠ、Pme Ⅰ 、BstX Ⅰ 将质粒线性化
- 03利用电转的方法将线性化的质粒转化到合适的毕赤酵母菌株中（X33和GS115表型为Mut+，KM71表型为Muts）
- 04将转化产物涂布到含有Zeocin抗性的转化板上
- 05从每个Mut表型的转化板上挑取6-10个单克隆进行少量表达
- 06选择表达量最高的表达体系进行大量表达
| 表达菌种 | 表达载体 | 标签位置 |
|---|---|---|
| X33 | PPICZaA | C端：His tag |
| KM71H | PPICZA | C端：His tag |
| GS115 | PPICZA | N端：His tag |
| SMD1168H | PPICZA | N端：GST tag |
平台提供的服务
平台配备专用酵母培养间与配套培养基，并提供全流程技术支持。
- 01提供4种毕赤酵母菌株（X33、GS115、KM71、SMD1168），6种pPICZ和pPICZa表达载体；
- 02提供胞内或分泌蛋白的表达服务；
- 03提供专门的酵母培养间，各种培养基；
- 04提供从分子克隆到蛋白纯化整个过程用到的实验试剂、仪器以及专门的技术人员。
技术交流
部分客户署名公司发表文章：
- 01IF 40.8
SARS-CoV-2 envelope protein impairs airway epithelial barrier function and exacerbates airway inflammation via increased intracellular Cl− concentration.
Signal Transduction and Targeted Therapy (2024) 9:74
- 02IF 14.7
Malaria oocysts require circumsporozoite protein to evade mosquito immunity.
NATURE COMMUNICATIONS (2022) 13:3208
- 03IF 12.085
Identification and functional characterization of a novel BEL1-LIKE homeobox transcription factor GmBLH4 in soybean.
https://doi.org/10.1007/s11240-018-1419-4
- 04IF 10
Nanopore efficiently identifies hepatitis D virus antigens in vitro assay.
Materials Today Physics 46 (2024) 101479
- 05IF 9.4
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New Phytologist (2021) 231: 1462–1477, doi: 10.1111/nph.1746
- 06IF 9.2
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International Journal of Biological Sciences. Published: 2021.03.25, doi:10.7150/ijbs.56357
- 07IF 7.3
Discovery of Clinical Candidate (5-(3-(4-Chlorophenoxy)prop-1-yn-1-yl)-3-hydroxypicolinoyl)glycine, an Orally Bioavailable Prolyl Hydroxylase Inhibitor for the Treatment of Anemia.
2020, 63, 17, 10045–10060
- 08IF 6.2
Adenosine Monophosphate-Activated Protein Kinase (AMPK) Phosphorylation Is Required for 20-Hydroxyecdysone Regulates Ecdysis in Apolygus lucorum.
Int J Mol Sci. 2023 May 11;24(10):8587, doi: 10.3390/ijms24108587
- 09IF 7.1
The major-effect quantitative trait locus CsARN6.1 encodes an AAA ATPase domain-containing protein that is associated with waterlogging stress tolerance by promoting adventitious root formation.
2018 Mar;93(5):917-930, doi: 10.1111/tpj.13819. Epub 2018 Feb 2
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